Theses et Memoires de l'universite d'Antananarivo

Resume

l’utilisation des tests de diagnostic rapide(tdr) occupent actuellement une place importante dans la prise en charge du paludisme notamment dans les pays tropicaux dont madagascar. ces tests sont basés sur la détection d’antigènes plasmodiaux dans le sang du patient à l’aide d’anticorps monoclonaux. en dépit de leur apport considérable, compte tenu des conditions réelles de travail dans les centres de santé, il faut s’assurer de la performance des tests, et de leur stabilité à la chaleur et à l’humidité. pour ce faire, il est envisageable d’utiliser des tests basés sur des anticorps recombinants plus stables afin de produire des tdr de nouvelle génération. ainsi, dans le cadre du programme de développement de nouveaux tdr pour le paludisme, nous nous proposons d’étudier des anticorps fab recombinants pour détecter deux antigènes de plasmodium pfhrp2 et hsp70.la caractérisation en laboratoire de réactivité des anticorps anti-hsp70 (g4c17 et e5a12) et les anticorps anti-hrp2 (f1110 et f1546) contre plasmodium sp a été effectuée. des anticorps recombinants dérivés fab ainsi que les protéines mimant ces cibles ont été produits chez e. coli. les anticorps ont été testés en elisa sandwich pour détecter des infections palustres chez des patients suspects de paludisme. la performance de l’elisa respectif a été principalement évaluée par comparaison à la microscopie et à la pcr. il a été démontré que les anticorps g4c17 et e5a12 anti-hsp70 reconnaissent le même épitope. un troisième anticorps anti-hsp70, c9c11 a été introduit dans l’étude. les résultats de la détection de hsp70 par l’elisa ont montré une faible concordance avec ceux de la microscopie et de la pcr (valeur de kappa de cohen <0,4). cependant, une sensibilité à 90,9% [ic95% : 62,3 – 98,4] a été observée dans la détection de p. vivaxpar rapport à la pcr. quant aux anticorps anti-hrp2, f1110 et f1546, la caractérisation immunologique et moléculaire a montré qu’ils peuvent être utilisés ensemble ou séparément. les résultats de la détection de hrp2 par l’elisa montrent une bonne concordance avec ceux de la microscopie et de la pcr (valeurs de kappa de cohen >0,8). en comparaison avec la pcr, la sensibilité de l’elisa dans la détection de hrp2 est de 97,1% [ic95% : 93,9 – 98,7%]. les anticorps fabf1110 et f1546 ont été produits avec succès. leur affinité et leur réactivité sur des extraits antigéniques purs et à la protéine recombinante pfhrp2 sont similaires à ceux des anticorps monoclonaux parentaux. les résultats obtenus avec les anticorps anti-hrp2 étudiés justifient leur considération pour le développement d’un outil de diagnostic du paludisme de nouvelle génération ; la protéine recombinante pfhrp2 étant une valeur ajoutée à cet effet. aussi, des expériences supplémentaires sur un plus grand nombre d’isolats de p. vivax sont nécessaires pour évaluer les anticorps anti-hsp70. l’affinité et la stabilité de ces anticorps anti-hsp70 et anti-hrp2 peuvent être encore améliorée par la mutagenèse dirigée.

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